Obtenção e isolamento de células-tronco da medula óssea

Abstract

As células-tronco são células com capacidade de autorrenovação e plasticidade. As células-tronco mesenquimais (CTMs) são células adultas encontradas na medula óssea, que têm capacidade de diferenciar em várias linhagens de células de origem mesodérmica. A medula óssea é um tecido de fácil acesso técnico para obtenção dessas células. Este trabalho, após aprovado pelo Comitê de Ética no Uso de Animais (CEUA), sob protocolo 011/17, teve como objetivo isolar as CTMs da medula óssea de camundongos utilizando meio de cultura DMEM isolado e em associação com gradiente de sacarose. Foram utilizados quatro (4) camundongos Swiss fêmeas jovens adultas. O contéudo da medula óssea foi coletado dos dois fêmures de cada camundongo. O conteúdo de cada camundongo foi unido ao outros e adicionado ao meio de cultura DMEM, sendo centrifugado e analisado, formando um pool de células Na primeira amostra, somente com meio de cultura, foram obtidas 4,3 x 10⁶ células. Após essa contagem, foi adicionado à amostra gradiente de sacarose, que foi centrifugado, separando a camada de células mononucleadas para avaliação, obtendo uma segunda amostra com um total de 8 x 10⁵ células. O uso do meio de cultura DMEM isoladamente não foi suficiente para isolar as células-tronco mesenquimais da medula óssea. Associando o gradiente de sacarose, foi possível a contagem das células mononucleadas isoladas, sendo um conteúdo de células reduzido em relação a amostra anterior. O método possibilita a obtenção e isolamento das células-tronco, que seriam importantes em um futuro desenvolvimento de uma terapia celular, por serem imunossupressoras e imunoprivilegiadas, tornando possível seu uso em transplantes alogênicos.